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本试剂盒是利用磁性纳米分离技术从PCR反应产物及其他酶促反应物中，提取纯化高质量DNA，操作简单、快速，并能有效的除去蛋白质，dNTP，引物等杂质，适用于自动化核酸纯化平台，纯化后的DNA可以应用到各类下游分子生物学实验。

• 适用范围广，回收效率高，对于100bp～50kb之间的DNA片段回收效率在95%以上。
• 样品体积范围广，不需要离心。
• 操作简单快速，20～30min完成核酸纯化。
• 实现核酸纯化高通量化和自动化。

• 将20～50μL的PCR反应液或酶促反应液移至无菌的1.5mL离心管中，按下表加入相应体积的Buffer MP。
  

  Sample (μL)	Buffer MP (μL)
  20	30
  30	45
  40	60
  50	75

• 加入10μL的MagicMag Beads，吸打混匀，室温静置1min。
  
  • 向离心管中加MagicMag Beads之前，请将MagicMag Beads充分混匀。
    
  • 请务必将MagicMag Beads加至液面以下，尽量将枪头上残留MagicMag Beads吸打干净。
    
  • 处理多个样品时，可先将Buffer MP与MagicMag Beads按上述比例混匀，然后向每个离心管中加入相应量的混合液。
• 将离心管置于磁力架上30s，待MagicMag Beads完全吸至管壁上之后，吸弃上清，从磁力架上取出离心管。
  
  • 吸弃上清前，若管口粘有少量MagicMag Beads，请用上清液将其洗至离心管内，以确保所有MagicMag Beads吸附至管壁上。
    
  • 吸弃上清时，请勿吸入MagicMag Beads，尽量吸净上清。
    
  • 从磁力架上取出离心管后，若有少量上清，请将离心管置于磁力架上，再次吸取上清。
• 加入500μL 85%乙醇，吸打或者点振混匀，将离心管置于磁力架上30s，待MagicMag Beads完全吸至管壁上之后，吸弃上清，然后从磁力架上取出离心管。
  
  • 吸弃上清前，若管口粘有少量MagicMag Beads，请用上清液将其洗至离心管内，以确保所有MagicMag Beads吸至管壁上。
    
  • 吸弃上清时，请勿吸入MagicMag Beads，尽量吸净上清。
• 重复步骤4一次，室温开盖干燥15～20min或者55℃恒温箱中开盖干燥5～7min至管内无液体残留。
  
  • 干燥前，请尽量吸净管内的液体。
    
  • 干燥前，若出现液体挂壁现象，可将离心管短暂离心之后，再将其置于磁力架上，待所有MagicMag Beads完全吸至管壁之后再吸净离心管内的液体。
• 加入20～50μL的TE Buffer(pH8.0)，65℃水浴5～10min，间或混匀。
  
  • 请将离心管壁上所有MagicMag Beads悬浮在TE Buffer中。
    
  • 若浓缩PCR产物，按照实验要求可以减少洗脱液的体积。
    
  • 根据实验需要可以将TE Buffer用无菌的双蒸水(pH>7.5)代替。
• 取出离心管并置于磁力架上30s，待MagicMag Beads完全吸至管壁上之后，小心吸取上清至新的离心管，即获得纯化的产物。
  
  • 吸取上清前，请确保MagicMag Beads完全吸至管壁，请勿吸入MagicMag Beads，否则影响产物纯度。

• PCR产物回收效率较低或者未回收到目的片段
  
  • PCR产物浓度太低。纯化前请通过琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物的浓度。
    
  • 结合不充分。加入Buffer MP和MagicMag Beads之后，请将其充分混匀，并使MagicMag Beads处于悬浮状态。
    
  • 操作过程中丢失MagicMag Beads。结合及洗涤过程中可能有少量的MagicMag Beads粘在离心管管口上，吸弃上清前请用少量的上清液清洗管口，使粘在管口的MagicMag Beads也吸附在管壁上。
    
  • 洗脱液不合适。洗脱缓冲液的pH值对洗脱效率有影响，如果使用水进行洗脱，请确保其pH>7.5,pH值过低可能导致洗脱效率降低。
    
  • 洗脱过程操作不当。洗脱时请将管壁上所有MagicMag Beads悬浮在TE Buffer中。
    
  • 洗脱过程忘记水浴。加入TE Buffer之后请65℃水浴5～10min，常温条件下MagicMag Beads只能释放少量的DNA，65℃条件下MagicMag Beads与DNA的作用力减弱，MagicMag Beads释放出大量的DNA。
• 回收的PCR产物进行后续酶切或者连接效率低
  
  • 乙醇有残留。请吸弃上清之后从磁力架上取出离心管，放置1min之后再将离心管置于磁力架上30s，吸净管底的液体。若出现残液挂壁现象，请短暂离心之后将离心管置于磁力架上30s，吸净离心管内的液体。
    
  • MagicMag Beads洗涤不充分。向离心管中加入85%乙醇以后，请充分混匀，使MagicMag Beads充分悬浮在85%乙醇中。
    
  • MagicMag Beads没有完全干燥。请将MagicMag Beads完全干燥，保证无乙醇残留。
    
  • 最后一
    步吸取上清时吸入MagicMag Beads。请确保所有MagicMag Beads吸至管壁上，再吸取上清。如果不小心吸入MagicMag Beads，请将上清液放回原管，待MagicMag Beads完全吸至管壁之后重新吸取上清。或者将吸取的上清DNA溶液10000rpm离心2min，再取上清。
    
  • 回收后的PCR产物在反复冻溶的情况下，会加速末端A和整个PCR产物的断裂，从而造成与T载体连接或直接酶切效率的下降。建议回收后立即进行酶切或连接实验。
    
  • 选择合适的PCR产物和T载体的摩尔比，有助于提高连接效率。
    
  • 请确保PCR最后72℃ 5～10min的延伸时间，这样才有足够的PCR产物在末段带有A附加碱基，保证较高的连接效率。